WA. 0812-9318-5185 | Teknik Imunohistokimia (IHK) menggunakan Antibodi Ready To Use (RTU) Merk Elabscience dengan alat Leica BOND MAX

Antibodi ready to use (RTU antibody) adalah antibodi yang dirancang agar pengguna dapat dengan mudah menggunakannya. Antibodi RTU dapat langsung dipakai oleh user dengan langsung melakukan pengenceran. Antibodi RTU sangat cocok untuk pemeriksaan imunohistokimia, karena tahap dari uji imunohistokimia cukup kompleks sehingga diperlukan reagen yang efisien untuk pengerjaan. Selain reagensia, kami juga dapat membantu dalam mengerjakan imunohistokimia secara sederhana, yaitu dengan menggunakan instrumen BOND™MAX (Leica). 

BOND™MAX merupakan produk alat yang dikeluarkan Leica (salah satu perusahaan besar instrumen diagnostik), yang dirancang dengan teknologi canggih untuk membantu pengerjaan pewarnaan imunohistokimia secara otomatis sehingga dapat efisiensi waktu, dan mendapat hasil yang optimal. Pengerjaan imunohistokimia dengan alat BOND™MAX (Leica) juga dengan antibodi ready to use semakin membantu anda bekerja terutama jika sampel yang akan diuji dalam jumlah banyak. Berikut Teknik pewarnaan imunohistokimia dengan antibodi RTU menggunakan alat BOND™MAX (Leica). 

1. Persiapan Alat dan bahan

1.1 Larutan Penjernih parafin

1.2 Alkohol absolut

1.3 Alkohol 95%

1.4 Larutan PBS

1.5 Tween-20

1.6 pena imunohistokimia

1.7 Bond™ Dewax Solution. Cat:AR9222, Leica.

1.8 Bond™ Wash Solution 10 x concentrate. Cat: AR9590, Leica.

1.9 Bond™ Epitope Retrieval Solution 1. Cat: AR9961, Leica.

1.10 Bond™ Epitope Retrieval Solution 2. Cat: AR9640, Leica.
Note: pilih larutan antibodi repair yang sudah tertera pada cara kerja antibodi    elabscience.

1.11 Bond™ Polymer Refine Detection. Cat: DS9800, Leica.

1.12 Bond™ Titration kit: Bond Titration Container Inserts dan Bond Titration Containers.  Hematoxylin Staining Solution. Cat: OPT9049, Leica.

1.13 Bond™ Aspirating Probe Cleaning. Cat: CS9100, Leica.

1.14 Bond™ Printer Ribbon & Labels Cxi (6Pack) Cat: S21.4610.A, Leica.

1.15 Bond™ Universal Covertiles. Cat: S21.2001, Leica.

1.16 Neutral Balsam.

2. Persiapan Instrumen

2.1 Automatic Immunohistochemical Staining System: BOND™ MAX, Leica.

3. Teknik Pewarnaan

Teknik pewarnaan yang akan dilakukan selanjutnya menggunakan alat BOND™ MAX, Leica. Atur pada software yang tersedia, seperti pengaturan tahap pewarnaan, pelabelan sampel, pengaturan memasukan preparat yang sudah dilabel ke mesin pewarnaan, pengujian kualitas. Lang detailnya dapat dilihat di bawah ini:

3.1 Pemanasan dan Penarikan Parafin

3.1.1 Panaskan Preparat pada suhu 60℃ selama 30 menit.

3.1.2 Panaskan Preparat pada suhu 72℃, kemudian tambahkan 150 µL larutan Bond Dewax, diamkan selama 30 menit lalu buang larutan, lakukan sebanyak 2 kali.

3.1.3 Diamkan preparat pada suhu ruang, kemudian tambahkan kembali 150 µL larutan Bond Dewax untuk mencuci preparat, lalu buang larutannya.

3.1.4 Cuci preparat dengan alkohol lakukan sebanyak 3 kali.

3.1.5 Tambahkan 150 µL Bond Wash Solution pada preparat dalam suhu ruang, lakukan sebanyak 2 kali.

3.1.6 Tambahkan kembali 150 µL Bond Wash Solution lalu diamkan preparat selama 5 menit dalam suhu ruang, dan buang larutan.

3.2 HIER 20 menit dengan prosedur ER1/ER2 

3.2.1 Masukan 150 µL ER1 atau ER2 pada preparat dalam suhu ruang.

3.2.2 Tambahkan kembali 150 µL ER1 atau ER2 pada suhu ruang kemudian panaskan sampai 100℃ dan diamkan selama 20 menit.

3.2.3 Dinginkan preparat sampai suhu ruang, kemudian diamkan 20 menit.

3.2.4 Panaskan preparat pada suhu 35°C, kemudian cuci dengan Bond Wash Solution lalu buang larutannya.

3.2.5 Dinginkan preparat sampai suhu ruang, kemudian tambahkan 150 µL Bond Wash Solution selama 3 menit dan buang larutannya.

3.3 Teknik IHK

3.3.1 Masukkan 150 µL Peroxide Block pada preparat dan diamkan selama 5 menit dalam suhu ruang.

3.3.2 Cuci preparat dengan 150 µL Bond Wash Solution lakukan sebanyak 3 kali, buang larutan setelah mencuci.

3.3.3 Masukan antibodi primer dari Elabscience kemudian diamkan selama 30 menit dalam suhu ruang.

3.3.4 Cuci preparat dengan 150 µL Bond Wash Solution lakukan sebanyak 3 kali.

3.3.5 Tambahkan 150 µL Post Primary pada preparat diamkan selama 8 menit dalam suhu ruang, lalu buang Post Primary.

3.3.6 Cuci preparat dengan 150 µL Bond Wash Solution lakukan sebanyak 3 kali.

3.3.7 Tambahkan 150 µL Polymer pada preparat diamkan selama 8 menit dalam suhu ruang, lalu buang kembali Polymer.

3.3.8 Cuci kembali preparat dengan 150 µL Bond Wash Solution.

3.3.9 Cuci preparat dengan 150 µL Deionized Water, kemudian buang air tersebut.

3.3.10 Masukkan 150 µL Mixed DAB Refine pada preparat kemudian diamkan selama 10 menit dalam suhu ruang, dan buang DAB nya.

3.3.11 Masukkan 150 µL Hematoxylin pada preparat, diamkan selama 5 menit dalam suhu ruang lalu buang larutan tsb.

3.3.12 Cuci Preparat dengan 150 µL Deionized Water.

3.3.13 Cuci kembali preparat dengan 150 µL Bond Wash Solution.

3.3.14 Terakhir cuci lagi preparat dengan Deionized Water.

3.4 Dehidrasi dan Penjernihan

3.4.1 Pada proses terakhir pewarnaan preparat, buang dahulu Deionized Water.

3.4.2 Rendam preparat pada alkohol 75% selama ½ menit diulangi 2 kali.

3.4.3 Rendam preparat pada alkohol 95% selama ½ menit diulangi 2 kali.

3.4.4 Rendam preparat pada alkohol absolut selama ½ menit diulangi 2 kali.

3.4.5 Rendam preparat dengan larutan transparent dewaxing selama 5 menit.

Note: Keringkan preparat setiap akan ganti larutan kurang lebih selama 5 detik.

3.5 Pemotongan preparat

3.5.1 Keluarkan preparat dari alat, lalu keringkan selama 5 detik, keringkan dengan blower atau pada lemari asam.

3.5.2 Teteskan 1-2 tetes neutral balsam (balsam netral) pada preparat kemudian tutup secara perlahan dengan cover glass.

3.5.3 Pastikan preparat jaringan tertutupi semua permukaanya oleh balsam dan juga pastika tidak ada gelembung setelah ditutup dengan cover glass.

3.5.4 Keringkan preparat di dalam lemari asam.

4. Pengamatan preparat dan berikan penilaian hasil

Catatan:

1. Antibodi RTU dari Elabscience cocok penggunaannya dengan  instrumen BOND MAX untuk pewarnaan imunohistokimia. Dikarenakan target antigen dalam setiap IHK berbeda maka perlu dengan cermat diperhatikan kembali manual protokol dari antigen repair.

2. Teknik ini cocok untuk reagen yang dimiliki produsen yang berbeda, perlu dievaluasi kembali untuk mendapatkan hasil yang optimal.

3. Teknik ini cocok untuk antibodi RTU Elabscience yang diaplikasi pada alat BOND MAX, jika ada perubahan prosedur pewarnaan imunohistokimia yang tida sama dengan Teknik diatas, maka user disarankan untuk optimasi kembali agar mendapat hasil yang optimal.

 

Subscribe to receive free email updates: